RIPA 裂解液的“强、中、弱”暗号：为什么拿强 RIPA 去裂解细胞做 Co-IP，你一辈子都拉不下互作蛋白？
1975 年 11月18日 · RIPA 裂解液（强/中/弱）、NP-40 / Triton X-100 非离子去垢剂与免疫共沉淀磁珠
你知道吗？
拿含 SDS 的强 RIPA 裂解液去做 Co-IP，就像开着推土机去考古现场抓两尊牵着手的泥塑——细胞膜是炸碎了，但两个蛋白牵着的手也被 SDS 剁得稀巴烂。
打开碧云天或赛默飞的试剂目录买蛋白提取裂解液时，新手最容易犯晕的就是看到一排长相酷似的瓶子：RIPA 裂解液（强）、RIPA 裂解液（中）、RIPA 裂解液（弱），外加一瓶 NP-40（或 IP）裂解液。
曾有无数师弟师妹为了省事，直接拿实验室平时跑常规 Western Blot 提总蛋白最爽的“强 RIPA 裂解液”去裂解细胞，然后加抗体磁珠做免疫共沉淀（Co-IP）验证蛋白 A 和蛋白 B 结合——结果 Input 里蛋白多得溢出来，IP 泳道里除了诱饵蛋白 A 自己，互作蛋白 B 连个鬼影都拉不下来！
为什么？这要从 RIPA（Radioimmunoprecipitation Assay Buffer，放射免疫沉淀缓冲液） 的历史说起。20 世纪 70 年代发明经典 RIPA 配方时，是为了用高亲和力抗体去抓一个哪怕变性了也能识别线性表位的单一放射性标记抗原。
为了把难溶的细胞核膜、染色质结合蛋白和跨膜蛋白全扒下来，经典“强 RIPA”是一个不折不扣的三去垢剂狼牙棒：它除了含有温和的 1% Triton X-100（或 NP-40，非离子去垢剂），还掺了 0.5%–1% 的脱氧胆酸钠（Sodium Deoxycholate，离子型胆盐） 和 0.1% 的 SDS（十二烷基硫酸钠，超强阴离子变性剂）！
非离子去垢剂（如 NP-40）只温柔地溶解磷脂双分子层膜，不破坏蛋白质之间的疏水与氢键结合；而一旦强 RIPA 里的 SDS 和高浓度脱氧胆酸钠冲进体系，它们就会像拆迁队一样钻进蛋白复合物的结合界面，给蛋白质表面强行刷满负电荷，把正在谈恋爱的蛋白 A 和蛋白 B 当场拆得妻离子散！
所以记住铁律：提核蛋白或总蛋白跑普通 WB 用强 RIPA，做 Co-IP 拉互作复合物必须用不含 SDS 的 NP-40 或弱裂解液！