氨苄平板上的“白嫖党”:为什么涂板过夜超过 16 小时,大菌落周围会冒出一圈假货卫星菌?
1978 年 9月14日 · 氨苄青霉素(Ampicillin / 羧苄青霉素)LB 固体琼脂平板与灭菌牙签
你知道吗?
真正有本事的阳性大菌落往周围吐口水把氨苄抗生素全解毒了,旁边一群没质粒的混子野菌立马围上来白嫖成一圈卫星城——挑菌时但凡手歪一毫米,你今晚的质粒就白提了。
每个周末睡懒觉睡过头、下午才去 培养箱拿转化平板的研究生,都见过一副诡异的画面:在加了氨苄青霉素(Ampicillin)的 LB 固体平板上,每一颗圆润饱满的大菌落周围,都像众星捧月一样围着一圈密密麻麻、针尖大小的迷你小菌落!
如果有不知情的新手随手拿枪头戳了一颗外围的小菌落去摇菌提质粒,第二天跑胶绝对是一片空白——因为这群小菌落根本就是一分钱没花、纯粹靠蹭吃蹭喝活下来的“白嫖党——卫星菌落(Satellite Colonies)”!为什么卡那霉素(Kanamycin)平板上极少见到卫星菌落,偏偏氨苄平板上是重灾区?
秘密全在抗性基因的“性格”里!卡那霉素抗性酶(氨基糖苷磷酸转移酶)是个老实巴交的“宅男”,只待在细菌肚子里保护自己;而 pUC 或 pET 质粒上携带的氨苄抗性基因 bla,编码的 eta-内酰胺酶(eta-lactamase) 却长着一段引导分泌的信号肽!
当真正转进质粒的阳性大菌落生长时,它会源源不断地把 eta-内酰胺酶吐到周围的琼脂培养基里,像扫雷一样把大菌落方圆几毫米内的氨苄青霉素水解得干干净净!同时,因为氨苄只能杀灭正在分裂造细胞壁的细菌,周围那些根本没转进质粒的阴性野菌本来只是被冻住没死透,一旦等了 16 小时以上发现周围的抗生素全被大哥清光了,立马集体满血复活,围着大哥长成了一圈专坑新手的“卫星城”!