移液枪肚子里的“隐形气溶胶喷泉”:为什么做 qPCR 和提 RNA 必须用贵三倍的带滤芯枪头?
1990 年 8月11日 · Axygen / Eppendorf 带滤芯无酶枪头(Filter Tips)与单道移液枪
你知道吗?
你以为液面没碰到移液枪杆就是干净的?在松开大拇指的毫秒瞬间,枪头里腾起的微米气溶胶喷泉早就把十亿个扩增子送进了移液枪肚子里。
很多导师在审实验室采购单时都会心疼得直抽抽:普通散装枪头只要几分钱一根,自己装盒灭菌就能用;为什么做 qPCR、RNA 提取和二代测序建库的学生,非要买一盒几十上百块的“带滤芯枪头(Aerosol-Barrier Filter Tips)”?
我吸液体的时候明明很小心,液面连枪头的一半都没超过,根本没碰到上面的移液枪杆,怎么可能会污染?如果你用高速摄像机拍下移液枪打液体的慢动作,绝对会惊出一身冷汗!1989 至 1990 年间,PCR 先驱 Higuchi 以及 Cone 与 Fairfax 在《Nature》和《BioTechniques》上发出了著名的“气溶胶污染警告”:当你按下移液枪活塞把液体打出枪头尖端、或者松开拇指活塞回弹的毫秒瞬间,枪头尖端的液膜破裂和空气急速回抽会在枪头内部掀起一股肉眼完全看不见的“微米级气溶胶喷泉(Micro-aerosol Plume)”!
而跑完一轮 PCR 的反应管里,每微升液体中含有高達 个扩增产物(Amplicon)分子!哪怕只有一颗直径 的隐形气溶胶微滴顺着气流飘进移液枪塑料套筒内壁住下来,里面就藏着上百万个 DNA 模板——当你下一枪换上新枪头去吸阴性对照(纯水)时,活塞向下推气就会把这颗老微滴吹进新管子里,让你接下来一整周的所有阴性对照全线崩溃假阳性!
枪头顶上那截白色的超高分子量聚乙烯(UHMWPE)疏水微孔滤芯,正是拦截这股隐形喷泉的救命大坝。