和哈根达斯冰淇淋同款的“洗膜神仙水”:为什么 TBST 里少滴了千分之一的吐温-20 就会全膜乌黑?
1982 年 8月22日 · Tween-20(吐温-20 粘稠液体)、1× TBST / PBST 洗膜液与剪刀剪尖的移液枪头
你知道吗?
在冰淇淋里它负责让奶油和水不吵架,在 TBST 洗膜盒里它负责把所有见异思迁乱粘膜的渣男抗体一脚踹飞,只留下死心塌地的真爱条带。
每次配 Western Blot 洗膜液(TBST)或 ELISA 洗液(PBST)时,最磨人的环节莫过于拿剪刀把蓝枪头的尖端剪掉一截,伸进那瓶像蜂蜜一样粘稠的浅黄色液体——Tween-20(吐温-20,聚氧乙烯山梨醇酐单月桂酸酯)里,费劲地吸出 打进一升缓冲液里。
顺便说一句,如果你翻开超市里哈根达斯冰淇淋或沙拉酱的配料表,看到的食品乳化剂“聚山梨酯-20(Polysorbate 20)”,跟你在实验室洗膜用的 Tween-20 是完完全全的同一种东西!为什么洗膜时不能直接拿纯净的生理盐水(TBS / PBS)去冲,非要加这千分之一的“冰淇淋乳化剂”?
如果有新手忘了加 Tween-20,最后曝光出来的 PVDF 膜必然是一整块伸手不见五指的“黑炭锅底”!1982 年 8 月,Batteiger 等人在《J. Immunol. Methods》上揭示了它的降噪魔法:一抗和二抗本质上都是巨大的免疫球蛋白,它们表面除了特异性识别抗原的指尖外,浑身上下还布满了黏糊糊的疏水斑块和电荷区。
如果不加保护,抗体在孵育时就会像牛皮癣一样靠微弱的疏水作用力胡乱粘在 PVDF 膜的缝隙和杂蛋白身上。而在缓冲液里滴入 的非离子表面活性剂 Tween-20 后,这群温和的乳化剂分子会像润滑油一样包裹在抗体和膜表面,把所有靠疏水力“逢场作戏”的乱粘抗体统统冲走,却对靠高亲和力氢键和离子键死死咬合的“真爱抗原-抗体对”秋毫无犯!