为什么测 DNA 永远用 260 nm、看纯度永远盯 1.8?二战硝烟中诞生的瓦伯格比值铁律
1942 年 7月12日 · NanoDrop 超微量分光光度计与石英比色皿
你知道吗?
瓦伯格本来只是想看一眼自己提纯的酵母酶里混进了多少核酸脏东西,随手写下的两个紫外波长比值,却成了后世亿万科研汪在 NanoDrop 前的审判铁律。
提完质粒或 RNA 后,你的第一反应一定是拎着移液枪跑到 NanoDrop 跟前,往检测基座上滴 样品,眼睛死死盯着屏幕上的两个数字:浓度,以及 是否在 1.8(DNA)或 2.0(RNA)左右。
你有没有想过,为什么全世界测核酸永远锁死在 ,测蛋白永远锁死在 ?这条铁律的发明人,居然是那位因发现癌细胞嗜好糖酵解(瓦伯格效应)而斩获诺贝尔奖的德国生化巨匠——奥托·瓦伯格(Otto Warburg)!
1941 年至 1942 年二战炮火纷飞期间,留在柏林威廉皇帝研究所的瓦伯格与助手 Walter Christian 在从酵母中提纯糖酵解关键酶“烯醇化酶(Enolase)”时遇到了烦心事:提出来的蛋白质里老是混着甩不掉的酵母核酸杂质,如果用传统凯氏定氮法测蛋白,每次都要把珍贵的酶烧成灰烬!
瓦伯格敏锐地利用他亲手改良的紫外光电分光光度计发现:蛋白质里的色氨酸和酪氨酸苯环在 处有强烈紫外吸收峰,而核酸里的嘌呤和嘧啶共轭杂环则在 处吸光最强!
两人顺手列出了一张双波长消光系数联立方程表——不消耗一滴样品,只要花十秒钟读出 和 的吸光度比值,蛋白和核酸谁污染了谁便一目了然!