水火不容的转膜双雄:为什么 PVDF 膜不泡甲醇就废,而 NC 膜一碰甲醇就化?
1985 年 8月12日 · Millipore Immobilon-P PVDF 膜、硝酸纤维素膜(NC 膜)与分析纯甲醇
你知道吗?
PVDF 膜是不粘锅特氟龙的高冷表妹,不喝一口甲醇根本不肯下水;而 NC 膜是无烟火药的暴脾气亲戚,沾一滴纯甲醇就会当场化作一滩春水。
做 Western Blot 转膜前,实验室里总上演着两派截然相反的仪式:用 PVDF 膜的同学必须把干膜扔进 100% 甲醇里泡 15 秒,看着白膜变成半透明才敢放进水里;而用 NC 膜(硝酸纤维素膜)的同学要是敢把膜往甲醇盆里一扔,不出十秒钟,手里那张几十块钱的进口膜就会像见了阳光的吸血鬼一样,当场软化、卷曲、溶解成一团黏糊糊的鼻涕状烂泥!
为什么两张长得一模一样的白纸脾气差这么多?1985 年 Millipore 公司的 Pluskal 团队将 PVDF(聚偏二氟乙烯)引入蛋白印迹,这种材料其实是特氟龙(不粘锅涂层)的亲戚,高分子链上挂满了强疏水的碳-氟键,表面张力极低,水分子根本钻不进它内部的微米级孔道——如果直接把干 PVDF 膜按进水里,膜孔里全是空气泡,电泳时电流根本过不去!
只有先用表面张力极低的甲醇钻进微孔赶走空气,再换水把甲醇顶替出来(浸润搭桥),水相缓冲液才能进驻膜孔。至于老前辈 NC 膜,它的化学真身其实是大名鼎鼎的“火棉胶(军用无烟火药的原料)”!硝酸酯基团与醇类、酮类极度相亲,泡进高浓度甲醇或丙酮里,无异于直接给它泼了卸甲水!