Western Blot 转膜三明治的生死口诀：“黑胶白膜”一旦放反，蛋白去哪儿了？
1979 年 9月1日 · Western Blot 转膜夹（红白黑夹子）、海绵垫、滤纸与 PVDF 膜
你知道吗？
全身披满 SDS 负电荷铠甲的蛋白质大军绝不走回头路；只要你把‘黑胶白膜’夹反一次，一整天的心血就会在半小时内跳进缓冲液大海里集体殉情。
在所有分子实验室的墙上或师兄的笔记本扉页上，几乎都用加粗红字写着同一句保命口诀：“黑胶白膜（或黑胶红膜）”——意思是夹转膜三明治时，黑色的夹板那一侧一定要放 SDS-PAGE 凝胶，白色（或透明/红色）夹板那一侧一定要放 PVDF 膜！
为什么顺序错一点就会万劫不复？让我们回到 1979 年 9 月 Towbin 等人在《PNAS》上确立的电泳转膜法则。在跑胶前煮蛋白样品时，阴离子去垢剂 SDS（十二烷基硫酸钠）早就按每两个氨基酸绑一个 SDS 分子的比例，把所有蛋白质原有的正负电荷彻底掩盖，给每个蛋白都裹上了一层厚厚的“负电荷铠甲”。
当你把转膜夹塞进电泳槽通上直流电时，黑色电极端连接的是电源负极（Cathode，），而红色/白色电极端连接的是正极（Anode，）。同性相斥、异性相吸，全身带负电的蛋白质大军在电场驱动下，只会义无反顾地从黑面朝白面发起冲锋！
如果有哪个熬夜恍惚的新手把膜放在了黑面、把胶放在了白面，通电 30 分钟后，所有蛋白质不会回头去撞身后的 PVDF 膜，而是直接穿过凝胶背面的滤纸和海绵，跳进一升冰冷的转膜缓冲液大海里“越狱蒸发”，留给你一张洗得比脸还干净的白膜！