电泳转膜夹与三明治电泳:Western Blot 的第一张硝酸纤维素膜诞生
1979 年 6月4日 · Bio-Rad Mini-PROTEAN 湿转转膜夹、Whatman 3MM 滤纸、NC 硝酸纤维素膜与脱脂奶粉封闭液
你知道吗?
海绵、滤纸、凝胶与硝酸纤维素膜在黑色夹子里紧紧相依,垂直电场横向一推,把水凝胶深处的蛋白幽灵原原本本拓印在了白色膜上。
每个在转膜台前拿滚轮小心翼翼把海绵、滤纸、聚丙烯酰胺胶和膜之间气泡赶得干干净净的研究生,嘴里都在念叨着那套祖传口诀:“黑胶白膜,负极到正极!”这套被称作“转膜三明治(Transfer Sandwich)”的固定操作,源于 1979 年 6 月瑞士巴塞尔米歇尔研究所的哈里·托宾(Harry Towbin)等人在《PNAS》发表的传世名篇。
在此之前,科学家把凝胶里的蛋白质电泳分离开后,要么拿大把同位素或者切胶浸泡,抗体分子太大根本钻不进致密的聚丙烯酰胺孔径网格里识别抗原。托宾等人突发奇想:既然凝胶内部钻不进去,为什么不在电场垂直方向施加横向电场,把带负电的 SDS 蛋白分子一股脑从胶里‘踹’出来、平移吸附到一层坚固耐磨的微孔薄膜上? 他们用两块多孔塑料网格夹住两张吸饱缓冲液的厚滤纸,中间严密包裹凝胶与带正电荷的高吸附性硝酸纤维素膜(NC 膜)。在平行板电极驱动下,蛋白质如影随形横向穿印在膜表面;随后用温和的牛血清白蛋白或脱脂奶粉封闭未结合空位,一抗二抗接力显影,蛋白质印迹(Western Blot)自此成为整个生命科学无可撼动的定性金标准。