两分钟搞定蛋白定量：Marion Bradford 的考马斯亮蓝 G-250 质子转移魔法
1976 年 5月10日 · Bradford 考马斯亮蓝 G-250 浓缩染色液、牛血清白蛋白标准品（BSA）、595 nm 分光光度计
你知道吗？
红褐色的酸性水滴扑进蛋白质的怀抱，去质子化的大 π 键在两分钟内绽放出艳蓝光谱，替千万生化狗省下了熬夜定量的青春。
几乎所有做蛋白质生化或分子生物学的研究生，每天都要在 96 孔板或 1 mL 比色皿里执行这一套仪式：取几微升未知蛋白，倒入澄清的红棕色药水，摇匀后液体瞬间泛起深邃迷人的艳蓝色，放进酶标仪测 595 nm 吸光度。这项每天在地球上被执行上百万次的检测，源自佐治亚大学女科学家玛丽昂·布拉福德（Marion M. Bradford）在 1976 年 5 月发表于《Analytical Biochemistry》上的传世论文（全科学界单篇引用前五的超级丰碑）。
此前测蛋白靠耗时数小时且受还原剂严重干扰的 Lowry 法，而 Bradford 法只需两分钟！其底层物理化学机制极为精妙：考马斯亮蓝 G-250 在极酸性配方（正磷酸 + 乙醇）中以双质子化的阳离子形式存在，显现黯淡的红褐色（吸光峰 465 nm）；当它遇到蛋白质表面的碱性氨基酸（特别是精氨酸 Arg，以及赖氨酸和组氨酸）时，强烈的静电与芳香环疏水作用使染料分子的磺酸基解离去质子化，一跃转变为去质子化的深蓝色阴离子状态，吸光峰强力红移至 595 nm！
光密度与蛋白质浓度严格呈正比，彻底颠覆了蛋白定量的效率极限。