沸水高压锅不掉片的分子铆钉:APES 硅烷化与多聚赖氨酸防脱载玻片
1983 年 4月15日 · APES 硅烷化防脱载玻片、多聚-L-赖氨酸包被液、柠檬酸盐抗原修复微波盒
你知道吗?
普通载玻片贴切片叫‘浮搁’,多聚赖氨酸叫‘强力静电魔术贴’,而 APES 硅烷化则是用共价键把细胞直接焊死在了玻璃上。
病理科与发育生物学实验室最大的“心肌梗死瞬间”,莫过于切了几天几夜的几微米珍贵石蜡切片,放进 95℃ 的柠檬酸盐抗原修复微波盒里加热二十分钟,拿出来一看——切片像融化的保鲜膜一样飘在滚水锅里,载玻片上光溜溜什么都没剩(彻底脱片)! 普通浮法玻璃表面是无定形二氧化硅(SiO2),遇水呈弱负电性;而切片中的蛋白质和 DNA 磷酸骨架同样带负电,同性相斥,仅凭脆弱的范德华力根本抵抗不住水分子沸腾热运动的撕扯。1983 年 4 月黄等学者在《Histochemistry》系统论证了高分子量多聚-L-赖氨酸(Poly-L-Lysine)对切片的保护机制:侧链上密密麻麻的质子化氨基()在玻片表面铺设出一层致密的正电荷“倒刺地毯”,死死咬住负电切片。
而为了对抗更狂暴的高压蒸汽与 70℃ 原位杂交甲酰胺,化学家掏出了 APES(3-氨丙基三乙氧基硅烷):分子一端的硅氧基与玻璃二氧化硅脱水缩合成坚固的 Si-O-Si 共价网架,另一端的氨基与切片蛋白质共价交联,相当于把细胞用无数根化学铆钉焊死在玻璃表面,任凭高压锅水煮风浪,我自岿然不动。