闻起来像甜果酒的DEPC水,为什么配好后非得进高压灭菌锅蒸一遍?
1970 年 2月10日 · DEPC 处理水 (RNase-free Water)
你知道吗?
前半夜替你锁死RNase的夺命组氨酸,后半程在121度蒸汽里引火自焚化作一缕果酒清香——DEPC堪称实验室里最深藏功与名的死士。
老派实验室准备提RNA或者跑Northern Blot前,总要让师弟去配一大瓶“DEPC水”:往超纯水里按千分之一(0.1%)的比例滴入剧毒的DEPC(焦碳酸二乙酯)原液,猛烈摇晃后放在通风橱里搅拌过夜,第二天再推进高压蒸汽灭菌锅里,121℃蒸上30分钟。
刚从灭菌锅端出来的DEPC水,只要你凑近一闻,就会闻到一股奇特而浓郁的“甜果酒香气”!很多人有个天大的误解,以为是121℃高温高压把水里的RNase(核糖核酸酶)杀死了——大错特错!RNase A拥有4对坚不可摧的二硫键,就算丢进沸水里煮半个小时,冷却后它照样能满血复活把你的RNA剪成渣。
真正杀死RNase的,是头一天晚上常温搅拌时的DEPC(由Fedorcsák与Ehrenberg于1966-1970年间引入核酸提取):DEPC是一种极其狂暴的亲电试剂,它会精准攻击RNase活性中心那两颗负责催化酸碱反应的“组氨酸(Histidine,His12和His119)”咪唑环,把它们共价修饰成乙氧甲酰基衍生物,彻底废掉RNase的武功!
那为什么第二天非要进灭菌锅蒸一遍呢?因为没反应完的残留DEPC不仅有毒,而且连你的RNA腺嘌呤碱基和后续加进来的逆转录酶也会一起修饰破坏!而在121℃高温水蒸气下,残留的DEPC会瞬间发生彻底的水解自爆,100%裂解成完全无害的“二氧化碳(CO2)”和“无水乙醇(C2H5OH)”——你闻到的那股迷人果酒香,正是DEPC粉身碎骨后留下的微量乙醇与微量酯类芳香!