胎牛血清“56度水浴烫半小时”的祖传规矩,到底是在灭活谁?
1975 年 1月12日 · 胎牛血清 (FBS) & 恒温水浴锅
你知道吗?
为了防住早就没多少的补体刺客,无数人亲手把五千块钱一瓶的胎牛血清炖成了营养流失的蛋花汤。
几乎每个刚进细胞房的研一新生,都见过师兄把一整瓶几千块钱的Gibco胎牛血清(FBS)丢进56℃水浴锅里精准烫30分钟,美其名曰“血清热灭活(Heat Inactivation)”。如果你斗胆问一句:“为什么要烫它?”十有八九会得到一个眼神:“祖师爷传下来的规矩,照做就是了!
”其实,这条规矩的历史可以追溯到19世纪末诺奖得主朱尔·博尔代(Jules Bordet)对血清“补体系统(Complement)”的研究,并在20世纪70年代免疫学培养中定型。成年动物血清里含有大量极其活跃的补体蛋白(特别是热不稳定的C1q、C2和B因子),一旦遇到外源细胞或抗原-抗体复合物,它们就会像多米诺骨牌一样级联激活,直接在你的培养细胞膜上凿出“膜攻击复合物(MAC)”大洞把细胞活活打爆;此外,早期的血清过滤工艺粗糙,56℃加热还能顺便杀灭混入的支原体。
然而到了现代,大厂生产的“胎牛血清”取自免疫系统尚未发育成熟的未出生牛胎,原本补体含量就极低,而且0.1微米三级滤膜早已滤除了支原体。相反,随手拿去56℃烫半小时,反而会把血清里珍贵的胰岛素样生长因子(IGF)、纤维连接蛋白和维生素烫得变性沉淀,让细胞越养越瘦!
如今除了做免疫杀伤、巨噬细胞或胚胎干细胞实验,绝大多数学者早已告别了这道“画蛇添足”的工序。