专治SDS去垢剂捣乱的紫罗兰魔术：BCA蛋白定量法诞生记
1985 年 3月5日 · BCA 蛋白定量试剂盒 (A液 + B液 50:1)
你知道吗？
两分子二辛可宁酸与一颗亚铜离子的紫色拥抱，把千万科研人从RIPA裂解液去垢剂沉淀的泥潭里捞了上来。
每次跑Western Blot上样前，我们都要在96孔板里把无色的BCA试剂A液和天蓝色的硫酸铜B液按50:1混匀，加入蛋白裂解液放进37℃温箱孵育半小时，看着孔里的颜色从苹果绿渐变成深邃的紫罗兰色，再去酶标仪测562 nm吸光度。
为什么全世界的蛋白实验室都独宠BCA？因为在1985年以前，科学家测蛋白浓度简直是在渡劫：统治学界三十多年的“Lowry法（1951年发表，史上引用最高论文，超30万次）”虽然灵敏，但里面的磷钼酸-磷钨酸（Folin酚试剂）有个致命死穴——只要你的裂解液里含有哪怕一点点用来撕碎细胞膜的去垢剂（如SDS、Triton X-100或NP-40），它就会当场产生白色沉淀直接报废！
而1976年问世的Bradford考马斯亮蓝法又同样怕高浓度SDS（而RIPA裂解液偏偏富含去垢剂）。1985年3月，美国Pierce（皮尔斯，现属Thermo）公司的化学家Paul K. Smith灵机一动，用稳定且水溶性极佳的二辛可宁酸（Bicinchoninic acid, BCA）取代了娇气的Folin试剂：在碱性环境下，蛋白质的肽键以及半胱氨酸、色氨酸先将二价铜离子（Cu2+）还原为一价亚铜离子（Cu+），随后两分子BCA像螃蟹钳子一样死死夹住一个Cu+，瞬间形成极其稳定的紫色螯合物，彻底无视1%以内的SDS和Triton干扰！