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引用超6.5万次的粉红神水:TRIzol一步法提RNA传奇

1987 年 3月18日 · TRIzol 试剂 (酸酚-异硫氰酸胍溶液)

摘要

一管散发着刺鼻煤焦油味儿的粉红色液体,把原本需要一整天的RNA抽提硬生生压缩到了一个小时。

你知道吗?

它那股熏得人流泪的刺鼻苯酚味,是脆弱的mRNA在满世界RNase追杀下唯一的护身罡气。

在实验室提取总RNA是一场跟死神赛跑的战争,因为你的手指汗液、飞沫甚至细胞刚裂解时的内源酶里,到处都是生命力顽强到煮沸都不死的RNase(核糖核酸酶)。在1987年以前,提RNA不仅步骤繁琐,还得把匀浆液架在超速离心机上甩十几个小时,取出来时RNA往往已经降解成了一滩渣。

波兰裔科学家Piotr Chomczynski与意大利学者Nicoletta Sacchi在1987年3月发表了一篇至今被引用超过6.5万次、位列人类科学史总引用榜前十的传世神作——酸性的异硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步抽提法(后来商品化为我们熟悉的粉红色药水TRIzol)。

它的配方堪称化学艺术:地表最强离液剂“异硫氰酸胍”在接触细胞的瞬间,直接把包括RNase在内的所有蛋白质空间结构撕得粉碎;随后加入氯仿离心分相,奇迹发生了——由于水相被严格调成了酸性(pH约4-5),DNA上的磷酸基团被质子化中和了负电荷,被迫留在中间层和下层粉红色的有机酚相里;而即使在酸性下依然顽强保持电离亲水状态的RNA,则独自留在最上层清澈的水相中!

吸出上层水相、加异丙醇一甩,晶莹的RNA沉淀便手到擒来。

来源

paper · Chomczynski, P., & Sacchi, N. (1987). Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Analytical Biochemistry, 162(1), 156-159.

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1987 年 3月18日
PAPER
Q1-11