十八角度激光散射的绝对分子量矩阵:怀亚特与 SEC-MALS 联用
1993 年 1月1日 · 多角度光散射仪石英恒温流动池(Flow Cell)与 18 角度环形砷化镓光电二极管阵列
你知道吗?
不要拿秒表记录分子在色谱迷宫里的逃脱时间,而要在它走出迷宫的出口射出一束光;十八只环形守候的眼睛,将分子的真实吨位与舒展骨架看穿于方寸之间。
当蛋白纯化工程师在普通凝胶过滤色谱(SEC)上看到一个漂亮的对称单峰时,内心往往暗自窃喜;然而一旦将流出液接进多角度激光光散射仪(MALS),残酷的现实常常瞬间将幻想粉碎——峰的前半段可能爬满了数百万道尔顿的不可见可溶性多聚体,而后半段才是单体!
传统色谱依靠保留时间推算分子量,但洗脱体积本质上反映的是分子的流体动力学体积(Hydrodynamic volume),而非真实质量。1990年代初,怀亚特技术公司(Wyatt Technology)的物理学家菲利普·怀亚特(Philip J. Wyatt)彻底改写了高分子与蛋白质表征规则。
他们制造出带有18个围绕石英流通池呈球形排列的超高灵敏光电二极管探测器。当激光穿透洗脱液中的高分子时,分子引起的非相干雷利散射光强在各个空间角度上呈现特定的空间角分布。根据经典的齐姆理论(Zimm plot equation),零散射角外推光强直接与绝对重均分子量 成正比,而角度依赖的角衰减斜率则直接给出了分子的均方根回转半径()。