刹车停滞后的最后一次冲刺：帕尔米特与麦克奈特核失控转录奔跑测定
1979 年 9月25日 · 低温离心分离的完整活细胞核悬液、[α-32P] UTP 放射性三磷酸尿苷与固定靶质粒的硝酸纤维素膜点阵滤纸
你知道吗？
要想看清是谁在暗中加速，最好的办法是掐死所有的起跑线，只清点此刻正在赛道上狂奔的残影。
给细胞加入某种药物后若目标基因mRNA暴涨，这究竟是因为启动子被激活导致转录产出暴增，还是因为降解被抑制导致mRNA被动堆积？常规Northern印迹或qPCR只能测得静态的稳态丰度，面对这一转录与转录后调控的矛盾束手无策。
1979年华盛顿大学的帕尔米特与麦克奈特在探究激素诱导机制时，设计了核奔跑实验（Nuclear Run-On）。实验人员在冰浴中用极低浓度温和去垢剂快速裂解细胞膜，离心分离出完整但代谢骤停的纯净细胞核。在该体系中新转录起始被冻结；随后将细胞核悬浮于含高离子强度和高比活[α-32P] UTP的反应液中并升温至30°C。
此时那些早已骑在染色质模板上的RNA聚合酶II被重新唤醒，但无法启动任何新转录，只能顺着已经咬住的模板把尚未合成完的转录本就地跑完这一程（Run-on），并将放射性同位素掺入新生链中！将提取的RNA与固定在NC膜上的靶质粒杂交，黑斑浓度百分之百正比于给药瞬间聚合酶的真实转录活性。