富 T 荒原上的错位五连击：张锋团队发现 Cas12a 与交错黏性末端
2015 年 10月22日 · 重组 AsCas12a (Cpf1) 核酸内切酶、42 nt 单链 crRNA、含 5'-TTTV-3' PAM 的靶标质粒与电泳槽
你知道吗？
在别人寸步难行的荒芜沙漠里，换一把自带榫卯结构的巧斧，处处皆是鬼斧神工的工场。
在以SpCas9为主流的早期基因编辑潮中，研究人员很快遇到了两大物理局限：第一，SpCas9严重依赖5'-NGG-3'前间隔邻近模体（PAM），面对人类基因组中广袤的富AT非编码区或疟原虫等高AT生物，经常面临无处下嘴的尴尬；第二，Cas9剪切产生平末端，细胞主要以NHEJ通路接合，而同源定向修复（HDR）敲入效率极低。
2015年张锋团队挖掘出了全新的二类V型CRISPR效应酶——Cas12a（Cpf1）。Cas12a颠覆了Cas9的诸多既定规则：它不再需要tracrRNA，仅需一条42 nt短crRNA即可指挥；其PAM识别位点颠倒为5'-TTTV-3'，点亮了全基因组的富T荒原！
更具革命性的是其剪切模式：Cas12a在远离PAM的靶标深处下刀，两条链发生不对称切割，产生长达5个核苷酸的5'交错黏性突出末端。这种预制黏性末端宛如自带榫卯结构，极大促进了外源供体DNA的精准缝合敲入。