封印两把催化利刃的分子路障：齐磊与魏斯曼发明 dCas9 转录调控术
2013 年 2月28日 · 催化失活突变质粒 dCas9-VP64（CRISPRa）/ dCas9-KRAB（CRISPRi）、特异性 sgRNA 载体与荧光显微镜
你知道吗？
最顶级的武器从不需要见血，只要在敌人的发动机前轻轻投下一道无法逾越的阴影。
当全世界都在为CRISPR-Cas9引发的双链DNA断裂（DSB）欢呼雀跃时，加州大学旧金山分校的齐磊与乔纳森·魏斯曼团队却敏锐地捕捉到了暴力剪切背后的隐忧：细胞靠非同源末端连接（NHEJ）修复双链断裂时会产生随机的碱基插入缺失，这种不可逆的基因组破坏有时如同在瓷器店里开推土机。
为什么不把Cas9的双刃剑封印起来，仅仅把它当成一个由RNA引导的超高精度基因组巡航定位器？2013年齐磊在Cas9的两个核酸酶催化中心精准引入了两个点突变：RuvC结构域的D10A突变与HNH结构域的H840A突变，由此诞生命名经典的“死Cas9（dead Cas9, dCas9）”。
dCas9完全丧失了切割磷酸二酯键的物理能力，但它在sgRNA的带领下与目标双链DNA结合的纳米级亲和力毫发无损！当单独使用dCas9结合在启动子或转录延伸区时，庞大的蛋白质宛如一座不可动摇的花岗岩路障，物理性阻挡RNA聚合酶的前进（CRISPRi）；而若在其末端融合KRAB阻遏域或VP64/p65激活域（CRISPRa），则能在毫发不损基因组双链的前提下，任意调高或关闭特定基因表达，开启无创表观调控时代。