剪掉脑袋上的单磷酸帽子：CIP 碱性磷酸酶让载体彻底戒掉自身环化瘾
1977 年 6月17日 · 小牛肠碱性磷酸酶（CIP / Antarctic Phosphatase）、1.5 mL 微量反应管与低熔点琼脂糖凝胶
你知道吗？
给质粒做个彻底的去势手术，它才会老老实实吞下你指定的基因拼图。
早期分子克隆最令人抓狂的绝望莫过于“假阳性地狱”：当你辛辛苦苦用同一种限制酶切开环状质粒载体，与外源DNA片段混合并加入T4连接酶过夜连接后，第二天涂布抗生素平板往往密密麻麻长出成百上千个克隆，然而挑菌提取质粒一跑胶，竟然全部都是没有插入任何外源基因的载体自身空环！
这是因为在微观流体中，被切开的质粒两端距离极近，天然携带的5'-单磷酸基团与另一端的3'-OH发生分子内自环化的热力学碰撞概率远远超过双分子碰撞。1977年阿克塞尔·乌尔里希在构建大鼠胰岛素重组克隆时，决定引入小牛肠碱性磷酸酶（CIP）彻底根治这一恶疾。
CIP酶专一水解核酸5'末端的单磷酸二酯键，使其变成裸露的5'-OH。被脱磷的载体两端彻底失去了T4连接酶催化磷酸二酯键生成所必需的能量供体基团，自身绝对无法环化；只有当自带5'-磷酸的外源插入片段介入并贡献其末端磷酸时，才能形成稳定的切口重组环，使重组阳性率从不足1%飙升至90%以上。