一叠吸水纸巾搭起的分子虹吸桥:埃德温·萨瑟恩与 Southern 印迹杂交术
1975 年 11月5日 · Whatman 3MM 滤纸、一叠高密度吸水纸巾(Paper Towel Stack)、20× SSC 转移液与硝酸纤维素膜(NC 膜)
你知道吗?
最伟大的分子分离往往不需要千万伏特高压,只需要一叠厚实干燥的卫生吸水纸。
限制性核酸内切酶能够将复杂基因组切割成数十万条大小不一的DNA碎片,在琼脂糖凝胶上跑成一团毫无分辨率的连续拖尾弥散带。如何在这片汪洋大海中一眼认出特异的某一条目标基因?爱丁堡大学的埃德温·萨瑟恩在实验台上搭起了一座构思极其精巧的“毛细虹吸水塔”。
萨瑟恩先将凝胶泡在氢氧化钠溶液中,把双链DNA温和解开为单链;随后在一个装满高盐SSC转移缓冲液的托盘上架起玻璃平板,两端垂下滤纸搭成导液桥。凝胶平放在滤纸上,凝胶上方紧贴一层脆弱的硝酸纤维素膜(NC膜),膜上方整齐码放厚达十余厘米、压着沉重玻璃砖的普通吸水纸巾。
借助极其强大的毛细管吸水作用,下方托盘中的高盐缓冲液源源不断被向上抽吸穿透凝胶和膜,DNA单链随着液流原位笔直向上垂直迁移,并在穿越带微弱正电荷的NC膜时被牢牢静电吸附截留。当移去纸巾烤膜并与同位素探针杂交时,清晰锐利的目标单带赫然跃于胶片之上,Southern印迹自此成为分子生物学第一大法宝。