从零拼出生命的第一个人造基因：柯拉纳化学-酶促全合成酵母 tRNA 基因
1972 年 12月1日 · 磷酸二酯化学合成层析柱、T4 DNA 连接酶、DEAE-纤维素柱与变性聚丙烯酰胺凝胶
你知道吗？
生命不再是上帝不可触摸的黑盒，只要化学试剂纯度够高，我们就能重写造物图纸。
在测定出酵母丙氨酸tRNA的全部一级序列后，哈宾德·柯拉纳决定在实验室发起一项前所未有的工程冒险：完全不借助生物体复制，从试剂瓶中的化学单体出发，手工拼接出一段具有生物学功能的真核基因。在没有现代自动化DNA合成仪的蛮荒时代，柯拉纳团队利用极为艰苦的磷酸二酯化学法，在玻璃层析柱上一步步缩合保护基团，耗费数年合成了十几个长度在5到15个核苷酸的短寡脱氧核糖核酸链。
随后，柯拉纳展现了神级酶学构想：他让这些化学合成链两两设计出互补交叠的黏性短重叠区，使其在试管中退火形成带有切口的假双链，再引入刚刚发现不久的T4 DNA连接酶，利用高能ATP驱动磷酸二酯键的共价缝合。最终，77个碱基对的完整酵母丙氨酸tRNA结构基因在试管中诞生，并在后续研究中证实具备启动子转录活性！
这项跨越五年的史诗级工作开辟了化学合成生物学的大门，证明生命的核心密码可以被人类完全人工铸造。