乳腺癌逆转录病毒整合点到结直肠息肉：TOPFlash 荧光素酶探明 Wnt/β-catenin 通路
1997 年 3月21日 · 小鼠乳腺肿瘤病毒（MMTV）整合克隆文库、TOPFlash/FOPFlash TCF报告基因质粒与双荧光素酶检测化学发光仪
你知道吗？
生命最优雅的分化与最残暴的癌变，全取决于细胞核门前那一尊β-catenin积木是否被按时销毁。
1982年罗埃尔·努塞（Roel Nusse）与哈罗德·瓦尔穆斯（Harold Varmus）利用小鼠乳腺肿瘤病毒（MMTV）原病毒插入诱变技术，首次克隆出了一个诱发小鼠乳腺癌的关键癌基因Int-1（后与果蝇无翅基因Wg合并命名为Wnt-1）。
然而在长达十五年的时间里，这一分泌型糖蛋白配体如何操控细胞命运一直扑朔迷离。而在人类临床病理中，家族性腺瘤性息肉病（FAP）与散发性结直肠癌普遍伴随APC抑癌基因的突变失活。荷兰乌得勒支大学医学院的汉斯·克莱弗斯（Hans Clevers）抓住了连接这两个看似孤立领域的金钥匙。
克莱弗斯团队敏锐地意识到转录因子TCF/LEF是Wnt下游的最终基因读码器，但单独的TCF在细胞核中却结合阻遏蛋白压制转录。克莱弗斯设计了一套极具极客精神的定量分子探针质粒：TOPFlash报告载体包含三个串联的最佳TCF结合位点（CCTTTGATC），其下游驱动荧光素酶（Luciferase）基因表达；对照FOPFlash载体则将核心位点人为点突变。
在化学发光仪上，当在野生型结直肠癌细胞中转染APC时，TOPFlash发光信号极低；