丽蝇唾液管薄层层析上的肌醇三磷酸:贝里奇点燃磷脂酰肌醇第二信使双级联
1983 年 5月1日 · 丽蝇唾液腺透化细胞(Blowfly Salivary Gland)、[3H]-肌醇标记薄层层析板与微型微量钙离子选择性电极
你知道吗?
膜内侧轻轻剪下一角糖脂糖头,就能在千分之一秒内让细胞内深锁的钙风暴席卷全场。
自20世纪50年代霍金夫妇(Hokin & Hokin)观察到乙酰胆碱能刺激胰腺组织翻新磷脂以来,细胞质膜上微量存在的磷脂酰肌醇类脂质为何在受体激活时发生剧烈代谢,困扰了生物学界三十年之久。剑桥大学的迈克尔·贝里奇(Michael Berridge)选择了一种极为敏锐的神经-分泌模型——红头丽蝇(Calliphora erythrocephala)的唾液腺。
当受到5-羟色胺(5-HT)刺激时,丽蝇唾液腺能在极短时间内向外喷射大量富含氯化钾的液体,而这一过程完全依赖细胞质内钙离子的飙升。贝里奇将唾液腺浸泡在含有[3H]-肌醇([3H]-myo-inositol)的缓冲液中长期平衡标记膜磷脂库,随后加入5-HT,并在刺激后1秒、2秒、5秒等极短时间窗内迅速加酸淬灭提取。
利用阴离子交换树脂层析和薄层层析(TLC)展开,贝里奇震惊地发现,在细胞内游离钙离子尚未完全抬升的前几秒,一种名为1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)的水溶性小分子产物以惊人的斜率爆发式增长!