蔗糖与泛影酸梯度上的微体孤岛:德迪夫用过氧化氢酶与尿酸氧化酶捕获过氧化物酶体
1964 年 4月1日 · 蔗糖/泛影酸葡甲胺连续密度梯度离心管、过氧化氢酶(Catalase)产氧微量测压管与尿酸氧化酶分光光度杯
你知道吗?
生命最精明的排毒方案,是在毒素生成的那一埃之内,同时安排好最强效的生化解毒剂。
在发现溶酶体之后,德迪夫和他的鲁汶团队面临着生化分离界的更深层混沌。在差速离心得到的轻线粒体级分中,除了酸性水解酶外,还混杂着过氧化氢酶(Catalase)、尿酸氧化酶(Urate Oxidase)和D-氨基酸氧化酶等多种耗氧氧化酶类。
当时主流电镜学家在肾脏和肝脏切片中观察到了结构模糊的致密“微体”(Microbodies),但生化学家普遍认为这只是线粒体退化的退行性碎片或者是某种不纯的溶酶体变体。为了以不可辩驳的物理证据实现物理分界,德迪夫团队放弃了粗糙的差速离心,转而开发了高分辨率的等密度连续浮力密度梯度超速离心技术。
他们采用高纯度蔗糖结合高折射率的泛影酸葡甲胺(Meglumine Diatrizoate)配制重力密度梯度柱,在100,000 × g超强离心力下驱动细胞器沉降。离心管中各组分展现出泾渭分明的条带分布:在密度1.21 g/cm³的深层位置,富含过氧化氢酶和氧化酶的颗粒形成了一条极其纯净、与水解酶完全脱钩的独立沉降带!